Hiperhomocysteinemia wzmaga stan zapalny naczyń i przyspiesza miażdżycę tętnic w modelu mysim ad

Serialne odcinki, o grubości 10 .m, zostały wycięte z poziomu płatków zastawki aortalnej do około 480 .m powyżej płatków w zatoce aortalnej, co drugą sekcję odzyskano i umieszczono na szkiełkach powlekanych żelatyną (5%), i cztery sekcje zostały umieszczone na każdym slajdzie w sumie pięć slajdów. Skrawki wybarwiono oleistą czerwienią O i hematoksyliną / jasnozieloną. Ocenę ilościową obszaru zmian miażdżycowych wykonano na jednym odcinku z każdego slajdu (zaczynając od miejsca, w którym najpierw pojawiają się trzy wyraźne zastawki) przy użyciu mikroskopu Zeiss i obrazu Zeiss (Zeiss, Thornwood, Nowy Jork, USA); przedstawiono średnią powierzchnię zmian ze slajdów od dwóch do pięciu (19). Złożone zmiany miażdżycowe zdefiniowano jako obecność włóknistych zakrętek, rozszczepów cholesterolu lub martwicy zmian (19). Ocena elastolizy. Read more „Hiperhomocysteinemia wzmaga stan zapalny naczyń i przyspiesza miażdżycę tętnic w modelu mysim ad”

Hiperhomocysteinemia wzmaga stan zapalny naczyń i przyspiesza miażdżycę tętnic w modelu mysim

Chociaż hiperhomocysteinemia (HHcy) jest dobrze znanym czynnikiem ryzyka rozwoju choroby sercowo-naczyniowej, podstawowe mechanizmy molekularne nie są w pełni wyjaśnione. Tutaj pokazujemy, że indukcja HHcy u myszy pozbawionych apoE przez dietę wzbogaconą w metioninę, ale zubożoną w kwas foliowy i witaminy B6 i B12, zwiększyła obszar i złożoność zmian miażdżycowych, oraz wzmocniła ekspresję receptora dla produktów końcowych zaawansowanej glikacji (RAGE), VCAM- 1, czynnik tkankowy i MMP-9 w układzie naczyniowym. Te efekty pośredniczone przez homocysteinę (za pośrednictwem HC) były znacząco tłumione, równolegle z obniżonymi poziomami HC w osoczu, po suplementacji diety folianem i witaminami B6 / B12. Wyniki te sugerują, że HHcy w rozwoju i stabilności blaszki miażdżycowej sugeruje, że wzbogacenie diety w witaminy niezbędne do metabolizmu HC może wywoływać efekty ochronne w układzie naczyniowym. Wprowadzenie W wielu badaniach epidemiologicznych wykazano, że podwyższone poziomy homocysteiny w osoczu (HC) zwiastują zwiększone ryzyko chorób sercowo-naczyniowych i udaru mózgu (1-22), jednak patogeneza molekularna leżąca u podstaw tych obserwacji in vivo musi jeszcze zostać w pełni zdefiniowana. Read more „Hiperhomocysteinemia wzmaga stan zapalny naczyń i przyspiesza miażdżycę tętnic w modelu mysim”

Wysoka częstość występowania białaczki u dużych zwierząt po terapii genowej komórek macierzystych za pomocą wektora retrowirusowego wyrażającego HOXB4 ad 7

W celu transdukcji komórki eksponowano na wektory retrowirusowe przy MOI wynoszącym 1. 2 przez 4 godziny w obecności czynników wzrostu. Po całonocnej hodowli w pożywkach zawierających czynniki wzrostu, komórki ponownie eksponowano na to samo MOI w stężonym wektorze przez 4 godziny. Natychmiast po tej drugiej ekspozycji, komórki zostały przemyte i podane w infuzji do śmiertelnie napromienionego zwierzęcia (920 cGy). Transdukcję i przeszczepianie komórek makaka opisano wcześniej (21). Read more „Wysoka częstość występowania białaczki u dużych zwierząt po terapii genowej komórek macierzystych za pomocą wektora retrowirusowego wyrażającego HOXB4 ad 7”

Wysoka częstość występowania białaczki u dużych zwierząt po terapii genowej komórek macierzystych za pomocą wektora retrowirusowego wyrażającego HOXB4 ad 6

W oparciu o aktywację pobliskich genów, o których wiadomo, że są zaangażowane w białaczkę, miejsca integracji obserwowane w klonach białaczkowych są najprawdopodobniej konsekwencją przedłużonej proliferacji in vivo i selekcji w komórkach repopulacyjnych poddanych transdukcji HOXB4. Zarówno psy jak i małpy rozwinęły białaczkę około 2 lata po transplantacji. Liczba integracji związanych z białaczką psów (1 lub 2 integracje) była mniejsza niż u małp (5 integracji). W naszych poprzednich badaniach zaobserwowaliśmy, że poziomy ekspresji HOXB4 były wyższe w komórkach psich niż w komórkach naczelnych nie będących ludźmi i że nadekspresja HOXB4 umożliwiła unieśmiertelnienie komórek psich, ale nie komórek małpich (34), co wspierałoby bardziej wyraźny wpływ HOXB4 w komórkach psa. . Read more „Wysoka częstość występowania białaczki u dużych zwierząt po terapii genowej komórek macierzystych za pomocą wektora retrowirusowego wyrażającego HOXB4 ad 6”

Wysoka częstość występowania białaczki u dużych zwierząt po terapii genowej komórek macierzystych za pomocą wektora retrowirusowego wyrażającego HOXB4 ad 5

Analiza podzbioru pokazuje zaznaczone komórki we wszystkich liniach komórek krwi. Przedstawiono analizę krwi obwodowej od 2 reprezentatywnych zwierząt. (B) Analiza Southern szpiku u 5 zwierząt wykazuje poliklonalność. Trawienie za pomocą BglII, które tnie wektor raz, uwalnia unikalny pas dla każdego miejsca integracji, podczas gdy trawienie SacI, które tnie wektor dwukrotnie, uwalnia pojedyncze pasmo kontroli wewnętrznej 1,9 kb. Tabela 2 Stabilne oznaczanie genów wysokiego poziomu w granulocytach u psów z przeszczepionymi komórkami repopulacyjnymi transdukowanymi MGMTGFP Analiza miejsca integracji 5 zwierząt i wielu innych długoterminowych zwierząt obserwowanych została opublikowana w innym miejscu (22, 27). Read more „Wysoka częstość występowania białaczki u dużych zwierząt po terapii genowej komórek macierzystych za pomocą wektora retrowirusowego wyrażającego HOXB4 ad 5”

Wysoka częstość występowania białaczki u dużych zwierząt po terapii genowej komórek macierzystych za pomocą wektora retrowirusowego wyrażającego HOXB4 czesc 4

Dane te wykazują zdolność HOXB4 do współdziałania z kluczowymi genami współpracującymi w celu promowania samoodnawiania komórek macierzystych i hamowania różnicowania się komórek w klonach białaczkowych, co ostatecznie prowadzi do jawnej białaczki. Podsumowując, dane te sugerują, że HOXB4 odegrał kluczową rolę w leukemogenezie dzięki swojej zdolności do skutecznej współpracy ze współpracującymi mutagennymi zdarzeniami. Dynamika klonów białaczkowych. Do śledzenia i ilościowego oznaczenia klonów białaczkowych u zwierząt zastosowano analizę PCR w czasie rzeczywistym SYBR Green (Figura 4, ACH). W okresie od do 2 miesięcy po transplantacji tylko 0,01%. Read more „Wysoka częstość występowania białaczki u dużych zwierząt po terapii genowej komórek macierzystych za pomocą wektora retrowirusowego wyrażającego HOXB4 czesc 4”

Wysoka częstość występowania białaczki u dużych zwierząt po terapii genowej komórek macierzystych za pomocą wektora retrowirusowego wyrażającego HOXB4 cd

Analiza Southern blot próbek szpiku z G374, G450 i K00339 wykazuje monoklonalność. DNA szpiku został strawiony BglII, który przecina transgen raz, uwalniając unikalne pasmo dla każdego integranta. Trawienie za pomocą SacI, które dwukrotnie przecinają transgen, wykazało prążek 3,9 kb dla wszystkich integrantów. (BdD) Miejsca integracji określono za pomocą LAM-PCR, i pokazano schematyczne reprezentacje miejsc integracji dla G374 (B), G450 (C) i K00339 (D). Egzony są reprezentowane przez czarne skrzynki. Read more „Wysoka częstość występowania białaczki u dużych zwierząt po terapii genowej komórek macierzystych za pomocą wektora retrowirusowego wyrażającego HOXB4 cd”

Wysoka częstość występowania białaczki u dużych zwierząt po terapii genowej komórek macierzystych za pomocą wektora retrowirusowego wyrażającego HOXB4 ad

Nasze badania pokazujące wpływ HOXB4 na komórki repopulacyjne krwiotwórcze u naczelnych innych niż człowiek zostały opublikowane wcześniej (21). Podobnie do naszych wyników u naczelnych innych niż ludzie, zaobserwowaliśmy wyższe poziomy komórek wykazujących nadekspresję HOXB4 we wczesnym okresie po transplantacji w porównaniu z poziomami po miesiącu u psów (Suplementowa Figura 1, materiał uzupełniający dostępny online w tym artykule; doi: 10.1172 / JCI34371DS1). Jeden z 3 psów, które otrzymały transdukowane HOXB4 komórki CD34 + zmarł 3 miesiące po transplantacji z powodu powikłań związanych z transplantacją. Pozostałe 2 psy (G374 i G450) obserwowano przez 2 lata. Około 15 miesięcy po transplantacji obserwowaliśmy spontaniczne zwiększenie liczby komórek znakowanych HOXB4 u psów G374 i G450, podczas gdy komórki kontrolne oznaczone żółtym fluorescencyjnym białkiem. Read more „Wysoka częstość występowania białaczki u dużych zwierząt po terapii genowej komórek macierzystych za pomocą wektora retrowirusowego wyrażającego HOXB4 ad”

Wysoka częstość występowania białaczki u dużych zwierząt po terapii genowej komórek macierzystych za pomocą wektora retrowirusowego wyrażającego HOXB4

Terapia genowa HSC za pośrednictwem retrowirusa jest stosowana w leczeniu osób z wieloma chorobami zagrażającymi życiu. Jednakże niektórzy pacjenci z SCID-X1 rozwinęli białaczkę pośredniczoną przez retrowirusy po leczeniu. Selektywna korzyść wzrostu komórek zmodyfikowanych genowo u pacjentów z SCID-X1 sugeruje, że transgen mógł odgrywać rolę w leukemogenezie. Zgłaszamy tutaj, że 2 z 2 psów i z 2 makaków rozwinęło białaczkę mieloidalną około 2 lata po przeszczepieniu komórkami, które nadeksprymowały homeoboks B4 (HOXB4) i komórki transdukowane kontrolnym wektorem gammaretrowirusowym, który nie wyrażał HOXB4. Komórki białaczkowe rozregulowały ekspresję onkogenów, blok różnicowania szpiku i nadekspresję HOXB4. Read more „Wysoka częstość występowania białaczki u dużych zwierząt po terapii genowej komórek macierzystych za pomocą wektora retrowirusowego wyrażającego HOXB4”

Receptor 1 hormonu koncentrującego melaninę, nowy cel odpowiedzi autoprzeciwciał w bielactwie ad 7

Możliwe jest, że niektóre receptory Ab. S nie zostały wykryte w badaniu radioblastycznym stosowanym tutaj przy użyciu rekombinowanego MCHR1. Rzeczywiście, najbardziej rozpowszechnione Ab do receptora hormonu tarczycy (TSHR) u pacjentów z chorobą Gravesa-Basedowa reagują tylko z natywną TSHR, ponieważ rozpoznają epitopy, które zależą od struktury białka (28). Częstość występowania przeciwciał MCHR1 może być zwiększona, jeśli natywny receptor został użyty do analizy surowicy bielactwa dla przeciwciał AB, które rozpoznają epitopy konformacyjne. Analiza pacjentów z bielactwem dodatnim dla MCHR1 wykazała brak wyraźnego związku między obecnością przeciwciał Ab receptora i wiekiem pacjenta w czasie pobierania próbek surowicy, wieku pacjenta z początkiem choroby, płcią, czasem trwania choroby lub podtypem bielactwa. Read more „Receptor 1 hormonu koncentrującego melaninę, nowy cel odpowiedzi autoprzeciwciał w bielactwie ad 7”