Matrix – zależne od metaloproteinazy-7 Uwalnianie czynnika martwicy nowotworu w modelu przepukliny dyski przepuklinowej ad 6

Tak więc, resorpcja dysku in vitro wymagała infiltracji makrofagów. RmWymagania dla TNF-a i infiltracja makrofagów w celu resorpcji dysku. Krążki z myszy typu dzikiego (/ wt) hodowano wspólnie z makrofagami myszy typu dzikiego (wt /) i MMP-7a (zerowe (7 (3)). Mokre masy określono w dniu 0 i dniu 3, a procent początkowej mokrej masy obliczono dla każdej pojedynczej tarczy. Gdzie wskazano, anty-TNF-a (1 ng / ml), kontrolna immunoglobulina (IgG, ng / ml) lub rekombinowany TNF-a (rTNFa, ng / ml) dodano do współhodowli. Przedstawione wartości reprezentują średnią i SD z 3. 5 dysków / grupę. * Znacząca różnica w stosunku do początkowej masy na mokro (P <0,05). Omówienie Naturalna resorpcja HD u pacjentów monitorowana postępującym zmniejszeniem wielkości krążka korelowała bezpośrednio z ilością unaczynienia (5), co było również związane z widoczną infiltracją makrofagów (7). Opracowaliśmy model HD in vitro obejmujący kokulturę mysich krążków kręgowych z makrofagami otrzewnowymi i wykazaliśmy utratę masy mokrej i zmniejszenie barwienia proteoglikanem, które naśladuje resorpcję HD (13). Stosując system ko-hodowlany i krążki lub chondrocyty wyizolowane z myszy pozbawionych MMP, wykazaliśmy, że makrofagi stymulowały wzrost poziomu MMP-3 w warunkach kokultury i że dysk MMP-3 był wymagany do resorpcji, infiltracji makrofagów i wytwarzania makrofagów. chemoatraktant. Teraz rozszerzyliśmy tę pracę, analizując wymóg dla MMP-3 i MMP-7 wytwarzanych przez aktywowane makrofagi w resorpcji HD przy użyciu modelu kokultury. MMP-7 pochodzący z makrofagów, ale nie MMP-3, był wymagany do resorpcji krążka i inwazji makrofagów w tkance dyskowej. Metaloproteinazy zostały wcześniej zaangażowane w migrację makrofagów i inwazję tkanek. Wykazano, że metaloelastaza (MMP-12) jest niezbędna do proteolizy makrofagów i inwazji tkanek przy użyciu myszy pozbawionych MMP-12F (27). Jednak wymóg MMP-7 był specyficzny dla inwazji dysków, ponieważ migracja w odpowiedzi na surowice lub zależny od MMP-3 (3 chondrocytowy chemoatraktant nie uległa pogorszeniu w pozbawionych MMP-7a makrofagach. Jest możliwe, że istnieje specyficzna rola MMP-7 w makrofagach związana z wymogiem degradacji materiału matrycy w dyskach. Jednakże istnieje znaczne nakładanie się między znanymi substratami macierzy pozakomórkowej MMP-7 i MMP-3 (28), chociaż tylko pierwsza jest wymagana do inwazji dysku. Chociaż nie możemy wykluczyć, że degradacja specyficznego substratu chrząstki MMP-7 przyczynia się do inwazji makrofagów na tkankę dyskową, mamy znaczący dowód, że kluczową rolą MMP-7 w makrofagach jest sheddaza wymagana do uwolnienia cytokin i komunikacji z nimi. dyskowe chondrocyty. Nasze wyniki wskazują, że substratem MMP-7, który jest ostatecznie odpowiedzialny za inwazję makrofagów i degradację tkanki krążkowej, jest TNF-a. Obecność TNF-a w makrofagach / krążkach wymagana była hodowla korzeni do resorpcji krążka i do indukcji białka MMP-3, jak określono za pomocą przeciwciała neutralizującego TNF-a. Komórkowe źródło TNF-a był głównie makrofagami, ponieważ poziom sTNF-. w hodowlach było podobne do obserwowanych w samych hodowlach makrofagów. Wiadomo jednak, że chondrocyty wytwarzają TNF-a. (29, 30), a leczenie krążków za pomocą rMMP-7 spowodowało niewielką indukcję MMP-3 (dane niepublikowane). Makrofagi MMP-7A w kokulturze wykazywały niedobór aktywności zależnej od TNF-zależnej resorpcji krążka i indukcji MMP-3, a także nie były zdolne do infiltracji makrofagów. W świetle naszych poprzednich badań wskazujących na ścisłą zależność pomiędzy uwalnianiem zależnego od MMP-3a chemoatraktanta z kokulturowanych chondrocytów, naciekiem makrofagów i resorpcją dysków, testowaliśmy możliwość, że TNF-a pośredniczy w MMP-7. był odpowiedzialny za indukcję MMP-3. Niedobór makrofagów MMP-7 zerowych w indukowaniu białka MMP-3 w współhodowlach został uratowany przez dodanie albo MMP-7 albo TNF-a, a efekt MMP-7 był pośredniczy przez szlak zależny od TNF-a, jak wykazano. z neutralizującym przeciwciałem. Wreszcie, wymóg dla makrofagów MMP-7 dla TNF-a wykazano, że uwalnianie ma kluczowe znaczenie dla funkcji makrofagów w resorpcji dysków przez wykazanie, że makrofagi MMP-7a pozbawione makrofagów uzupełnione rTNF-a wykazują utratę masy mokrej równoważną utracie obserwowanej dla makrofagów typu dzikiego. Wnioskujemy, że uwolnienie TNF-a z makrofagów jest krytyczną funkcją makrofagów MMP-7 w modelu kohodowli resorpcji HD. Rola MMP-7 w TNF-a uwalnianie jest zaskakujące, ponieważ wykazano, że MMP-7 rozszczepia rekombinowany TNF-a. (26), enzym zidentyfikowany jako główny TNF-a sheddaza jest członkiem rodziny białek powierzchniowych dezintegriny i metaloproteinazy (ADAM) określanej jako TNF-a. enzym konwertujący (TACE) (31, 32) [więcej w: osłabienie organizmu przyczyny, ciśnieniomierz elektroniczny, olej kokosowy na zmarszczki ] [hasła pokrewne: trojanek, jacek rybacki, gregor laubsch ]