Niedobór czynnika VII ratuje śmiertelność wewnątrzmaciczną u myszy związanych z deficytem inhibitora szlaku tkankowego cd

Rozcieńczone osocze (1:20 lub 1:40, obj./obj., W osoczu zubożonym w TFPI) inkubowano z równą objętością kompleksu FVIIa / TF w 37 ° C przez 30 min na płytce do mikromiareczkowania. Następnie dodano ludzki FX (0,2 gramy) i reakcję dalej inkubowano w 37 ° C przez 15 min. Po dodaniu EDTA (1 mM, stężenie końcowe) i substratu Spectrozyme fXa (0,5 mM, stężenie końcowe) zmierzono absorbancję przy długości fali 405 nm w 5-minutowych odstępach. Wyniki Generowanie FVII + / A / TFPI + /. myszy. Myszy niosące FVII + /. genotyp został skrzyżowany z genotypem TFPI + /. genotyp do wytwarzania podwójnie heterozygotycznych zwierząt. Myszy posiadające połączone FVII + / y / TFPI + /. genotyp wydawał się zdrowy i hodowany normalnie. Charakterystyka potomstwa z podwójnych heterozygotycznych krycia. Zebrano 309 myszy z podwójnych heterozygotycznych krycia. Ta grupa składała się ze wszystkich potomków, w tym tych, które poświęcono na eksperymenty, odkryto martwe lub częściowo skonsumowane. Spośród dziewięciu możliwych genotypów, które można wytworzyć z tych krzyżówek, wszystkie były obecne w przybliżeniu w oczekiwanej dystrybucji mendlowskiej, z wyjątkiem potomstwa niosącego FVII + / + / TFPI (3). (22% oczekiwanych) i FVII + / y / TFPI. /. (52% oczekiwanych) genotypów (tabela 1). W sumie 65% pojedynczo homozygotycznego FVII. /. myszy znaleziono po urodzeniu, zgodnie z wcześniejszymi obserwacjami (9). Aktywności plazmy TFPI i fVII określono z sześciotygodniowego potomstwa wyhodowanego z podwójnych krzyżówek heterozygotycznych (tabela 1). TFPI + /. zwierzęta posiadały około 50% aktywności TFPI w porównaniu z ich miotami typu dzikiego w FVII + / + i FVII + /. tła. Heterozygotyczność w locus fVII nie miała wpływu na aktywność TFPI. Podobnie, FVII + /. heterozygoty posiadały 50% aktywności fVII zwierząt FVII + / + zarówno w TFPI + /. i myszy TFPI + / +. FVII. /. myszy urodziły się z oczekiwaną częstością na wszystkich genotypowych podłożach TFPI (Tabela 1). Myszy te wygasły zaraz po urodzeniu z powodu krwotoku śródbrzusznego lub późniejszego z krwawienia śródczaszkowego, jak opisano wcześniej (9). Tak więc utrata aktywności TFPI (50% w TFPI + / y lub 0% u zwierząt TFPI (3 (y) nie zmieniła patologii FVIIa / r. Zwierząt. Tabela Rozkład FVII / TFPI. genotypy i aktywności w osoczu uzyskane z krzyżowania krzyżowego FVII + /. i TFPI + /. myszy Przeciwnie, genotyp FVII miał głęboki wpływ na fenotyp TFPI. /. myszy. Jak podano wcześniej (10), FVII + / + / TFPI. /. genotyp był znacznie niedostatecznie reprezentowany po urodzeniu (Tabela 1). Nieliczne noworodki, które przeżyły embriogenezę, straciły ważność podczas lub bezpośrednio po urodzeniu. Makroskopowo kolor skóry był ciemnofioletowy, a siniak był łatwo obserwowalny. Noworodki te były również zawsze wykrywane po rozpoczęciu martwicy; w związku z tym interpretacje histologiczne nie byłyby wiarygodne i nie zostały wykonane. Co ważne jednak zwierzęta z FVII. /. / TFPI. /. genotyp urodził się na oczekiwanej częstotliwości mendlowskiej (Tabela 1). Zwierzęta te uległy takiemu samemu krwotokowi wewnątrz jamy brzusznej lub wewnątrzczaszkowej, jak miało to miejsce w przypadku zwierząt FVIIa / a / TFPI + / +. Najstarsza z tych ostatnich myszy przeżyła do dnia 35. Tak więc okazało się, że zwierzęta podwójnie homozygotyczne (FVIIa / a / TFPI (3 /) zostały uratowane ze śmiertelności wewnątrzmacicznej obserwowanej w FVII + / + / TFPI (3). zarodki. Dodatkowo FVII + /. / TFPI. /. myszy rodziły się również z większą częstotliwością niż myszy z FVII + / + / TFPI. /. myszy (tabela 1). Te noworodki zostały znalezione martwe lub zmarły zaraz po urodzeniu. Makroskopowo myszy te były również fioletowe, a niektóre stłuczenia były ponownie widoczne. Upłynnienie mózgu uniemożliwiło analizę histologiczną tej tkanki; jednak barwienie immunologiczne H & E i immunofluorescencji (ogenu) wskazało na krwotok (Fig. 1a) i rozlany odkładanie fibryny (Fig. 1b) w śródmiąższowej wątrobie. Krwotok obserwowano również w nerkach (dane niepokazane). Ponieważ zwierzęta tego genotypu były niedostatecznie reprezentowane, nie było jasne, czy poziom 50% FVII (FVII + / a) również spowodował całkowite uratowanie śmiertelności wewnątrzmacicznej TFPI. /. zarodki. Ponownie, ponieważ rozpoczęto nekrozę u tych zwierząt, nie można było wiarygodnie określić przyczyny zgonu. Dlatego też potomstwo podwójnych heterozygotycznych krycia badano przed urodzeniem. Figura (a i b) wybarwianie H & E (a) i antyfibryną (ogen) immunobarwienia (b) sąsiadującego P0.5 FVII + / a / TFPI2 /. sekcje wątroby wskazujące na krwotok śródmiąższowy i rozlany odkładanie fibryny. (c) Widok z góry mózgu z FVII + / y / TFPI. /. Zarodek E17.5 po usunięciu skóry i płytki czaszki, pokazujący kałuże krwi na nieprzezroczystym spłaszczonym mózgu
[patrz też: młody jęczmień w proszku, szczepionki na pneumokoki, olejowanie włosów kręconych ]
[podobne: paznokcie w dwóch kolorach, osłabienie organizmu przyczyny, pogotowie stomatologiczne kielce ]