Wysoka częstość występowania białaczki u dużych zwierząt po terapii genowej komórek macierzystych za pomocą wektora retrowirusowego wyrażającego HOXB4 ad 5

Analiza podzbioru pokazuje zaznaczone komórki we wszystkich liniach komórek krwi. Przedstawiono analizę krwi obwodowej od 2 reprezentatywnych zwierząt. (B) Analiza Southern szpiku u 5 zwierząt wykazuje poliklonalność. Trawienie za pomocą BglII, które tnie wektor raz, uwalnia unikalny pas dla każdego miejsca integracji, podczas gdy trawienie SacI, które tnie wektor dwukrotnie, uwalnia pojedyncze pasmo kontroli wewnętrznej 1,9 kb. Tabela 2 Stabilne oznaczanie genów wysokiego poziomu w granulocytach u psów z przeszczepionymi komórkami repopulacyjnymi transdukowanymi MGMTGFP Analiza miejsca integracji 5 zwierząt i wielu innych długoterminowych zwierząt obserwowanych została opublikowana w innym miejscu (22, 27). Co ciekawe, wykryliśmy insercje wirusów w podobnych genach, w tym CCDN3, JAK1, LMO2, MYH9 i PRDM16, bez rozwoju białaczki, co dodatkowo potwierdza hipotezę, że integracja tylko w loci onkogenów może nie być wystarczająca do zainicjowania leukemogenezy. Omówienie W tym artykule autorzy raportu stwierdzili, że ekspresja HOXB4 za pośrednictwem retrowirusów w komórkach repopulujących hematopoetycznie prowadzi do monoklonalności i białaczki u 2 z 2 psów i z 2 makaków, około 2 lat po przeszczepieniu. Przeciwnie, ponad 40 psów i małp otrzymywało komórki CD34 + zmodyfikowane retrowirusem z transgenami innymi niż HOXB4, w tym 5 psami, które otrzymały transdukowane komórki MGMT z użyciem tego samego szkieletu wektora jak u opisywanych tutaj zwierząt HOXB4 i wszystkie te zwierzęta utrzymały normalna hematopoeza poliklonalna po transplantacji. Rola HOXB4 w rozwoju białaczki u tych zwierząt jest dalej wspierana przez eksperymenty knockdown HOXB4 pokazujące różnicowanie komórek białaczkowych bez nadekspresji HOXB4. Retrowirusy od dawna wiadomo, że powodują białaczkę poprzez mutagenezę insercyjną. W dużej grupie myszy obserwowano dominację klonalną krwiotwórczych komórek macierzystych za pomocą znakowania genu retrowirusowego (28, 29); ponadto, przeniesienie genu retrowirusowego wysokiej kopii markera lub genu wywołującego białko oporności na lek u myszy z powodu kombinatorycznej insercyjnej mutagenezy (30, 31). Badania nad naczelnymi nieczłowieczymi za pomocą preparatów wektora retrowirusowego zawierających wirusy zdolne do replikacji indukowały chłoniaka z komórek T (32). Przy użyciu wirusów niekompetentnych w replikacji, tylko Seggewiss i wsp. Mieli tylko jeden raport. (33) insercyjnej mutagenezy u naczelnych innych niż człowiek. Badacze znaleźli śmiertelny mięsak szpikowo-szpikową u małpy 5 lat po przeszczepie z pseudotypowanym retrowirusowym wektorem RD114 . opartym na MSCV .. Co ciekawe, zwierzę to miało ponownie jeden klon, a także otrzymało cykl chemioterapii. Zwierzę to było z 7 zwierząt, które przeszły transplantację z użyciem podobnego wektora i obserwowano je przez ponad 5 lat. Badacze zwracają również uwagę, że było to jedyne zwierzę, które rozwinęło białaczkę lub nieprawidłową hematopoezę z ponad 80 dużych zwierząt, które obserwowano długoterminowo (33). Te obserwacje na dużych zwierzętach, łącznie z klinicznymi testami terapii genowej komórek macierzystych w przypadku chorób innych niż SCID-X1, sugerują, że rozwój białaczki wywołany jedynie przez mutagenezę insercyjną występuje z bardzo małą częstością u dużych zwierząt lub ludzi, podczas gdy terapia genowa za pomocą retrowirusa wektor eksprymujący HOXB4 lub IL2R. i prawdopodobnie inne geny promujące wzrost znacznie zwiększają częstość występowania białaczki. W naszym badaniu 3 z 4 zwierząt, które otrzymały komórki wykazujące nadekspresję HOXB4 i które miały co najmniej 2-letnią obserwację, rozwinęło białaczkę, co jest częstszym zjawiskiem niż w badaniach SCID-X1. Może to być spowodowane tym, że HOXB4 promuje samoodnawianie komórek macierzystych i rozległą ekspansję komórek szpikowych (34), podczas gdy IL2R. rozszerza tylko komórki limfoidalne. Wszystkie 4 przypadki w testach SCID-X1 były białaczkami limfocytów T, podczas gdy wszystkie 3 białaczki w naszym badaniu były białaczkami szpikowymi, co raczej nie jest przypadkową koincydencją. Zakładamy, że nie ma różnicy pomiędzy tymi wektorami wirusowymi w początkowej selekcji miejsc integracji. Zamiast tego, nasze dane sugerują, że jest to konsekwencja współpracy onkogenu (lub współpracy w miejscu integracji), jak sugerowano w badaniu na myszach, w którym kooperatywność między LMO2 i IL2R. zostało udokumentowane (35). Badania na naszych innych zwierzętach zidentyfikowały miejsca integracji w LMO2 (22). Jednakże, nie wykryliśmy żadnej integracji w miejscach LMO2 w zmodyfikowanych genach komórkach zwierząt tu opisanych, chociaż nie można wykluczyć, że wystąpiło to w mniejszych klonach, ale na poziomach poniżej wykrywalności i bez widocznej konsekwencji, być może z powodu HOXB4. . Podano zdolność umiarkowanego hamowania repopulacji limfocytów (36, 37)
[podobne: olejowanie włosów kręconych, maciej zagłoba zygler, szczepionki na pneumokoki ]
[hasła pokrewne: śliwka w czekoladzie kalorie, trojanek, jacek rybacki ]