Zwiększona ekspresja receptora C5a w sepsie czesc 4

Pięć mililitrów 70% etanolu wstrzyknięto do jamy otrzewnowej i pozostawiono na 1,5 minuty przed usunięciem narządu. Następnie wątrobę, nerki i płuca wycięto w sterylny sposób i przemyto w kąpieli z 70% etanolem przez 20 sekund, aby uniknąć powierzchniowego zanieczyszczenia bakteryjnego. Każdy organ następnie ręcznie homogenizowano w 3 ml sterylnego 0,9% NaCl. Następnie dodano 2 ml wzbogaconej infuzji mózgu i serca. Następnie próbki wysiewano na 5% agar z krwią z owsa lub beztlenowy agar z krwią i inkubowano przez 48 godzin w temperaturze 35 ° C w warunkach tlenowych i beztlenowych. CFU następnie oznaczono na wszystkich płytach i pomnożono przez współczynnik rozcieńczenia. Dane przedstawiono jako CFU na 100 ul nierozcieńczonego homogenatu tkankowego. Wyniki Zwiększone wiązanie 125I-aC5aR in vivo narządów podczas posocznicy wywołanej CLP. Aby ocenić zmiany w ekspresji C5aR podczas posocznicy, 125I-a5aR (1,6 Ci) wstrzyknięto dożylnie myszom 0, 3, 6 i 12 godzin po CLP i 15 minut przed poświęceniem zwierząt. Stężenie przeciwciała oparto na wynikach z wstępnych eksperymentów (dane nie pokazane). W przypadku zwierząt kontrolnych równoważną ilość 125 lO normalnego króliczego IgG (125I-IgG) podawano 0, 6 i 12 godzin po CLP, jak opisano powyżej. Figura podsumowuje wyniki badań wiązania. Figura 1a pokazuje wyniki wiązania 125I-a5aR w płucach, wątrobie, nerce i sercu w różnych punktach czasowych po CLP. W każdym z narządów, wiązanie 125I-a5aR było znacząco zwiększone we wczesnych fazach sepsy (3 i 6 godzin) w porównaniu z wartościami uzyskanymi przez zwierzęta w czasie 0. W płucach gwałtowny wzrost wiązania 125I-p. C5aR wystąpił 6 godzin po CLP; o 12 godzin wzrost wyraźnie się zmniejszył. W wątrobie i nerkach znacznie zwiększone wiązanie wystąpiło po 3 godzinach, ze szczytowym wiązaniem po 6 godzinach. W sercu obserwowano ciągły wzrost wiązania 125I-a5aR do 12 godzin po indukcji CLP. Figura 1b pokazuje wyniki wiązania z myszy, którym wstrzyknięto 125I-IgGs. Nie zaobserwowano znaczących zmian w wiązaniu 125I-IgG w jakimkolwiek narządzie 6 i 12 godzin po CLP w porównaniu z wiązaniem po 0 godzinach. Co ciekawe, w sercu wiązanie 125I-IgG wydawało się nieznacznie zmniejszone 6 i 12 godzin po CLP, w porównaniu z 0-godzinnymi grupami kontrolnymi. Figura (a) In vivo wiązania 125I-a5aR do narządów 0, 3, 6 i 12 godzin po CLP. Wiązanie wyraża się jako stosunek cpm na gram do cpm w 100 .l krwi od każdego zwierzęcia, otrzymanej 15 minut po dożylnym wstrzyknięciu 125I-a5aR. (b) Wiązanie in vivo znakowanej 125I króliczej IgG do podobnych narządów, wyrażone podobnie jak w danych w. Dane są reprezentatywne dla trzech do sześciu zwierząt dla każdego punktu czasowego. * Istotność statystyczna w grupach leczonych w porównaniu ze zwierzętami kontrolnymi. Chociaż narządy były intensywnie przepłukiwane w celu usunięcia resztek krwi, przeprowadziliśmy również eksperymenty na zwierzętach zubożonych w neutrofile w 0 i 6 godzin po CLP, aby ocenić, czy wewnątrznaczyniowe neutrofile są odpowiedzialne za obserwowany wzrost wiązania in vivo 125I-a5aR. Figura 2 pokazuje znacząco zwiększone wiązanie 125I-a5aR we wszystkich czterech narządach myszy pozbawionych neutrofilów 6 godzin po CLP. Wzrost był porównywalny z poziomem stwierdzonym w wątrobie, nerkach i sercu u myszy z nietkniętymi neutrofilami. W płucach wzrost wiązania był mniej znaczący u myszy CLP z niedoborem granulocytów obojętnochłonnych, w porównaniu ze zwierzętami nietkniętymi neutrofilami. Odpowiednio, w płucu możliwe jest, że pełna regulacja w górę C5aR jest zależna od obecności neutrofilów. Figura 2 Wiązanie in vivo 125I-a5aR z różnymi narządami u myszy zubożających neutrofile 0 i 6 godzin po CLP. Wiązanie wyraża się jako stosunek cpm na gram do cpm w 100 .l krwi od każdego zwierzęcia, otrzymanej 15 minut po dożylnym wstrzyknięciu 125I-a5aR. * Istotność statystyczna w grupach leczonych w porównaniu ze zwierzętami kontrolnymi. Dane reprezentują od czterech do siedmiu zwierząt w grupie. PMN, neutrofil polimorfojądrowy. Hamowanie wiązania 125I-C5a przez a C5aR. Doświadczenia wiązania z 125I (3 mysim C5a przeprowadzono in vitro i in vivo w celu oceny wpływu A5aR w celu zmniejszenia wiązania C5a. Rysunek 3 podsumowuje wyniki tych eksperymentów. Na Figurze 3a izolowano mysie neutrofile otrzewnej myszy i wstępnie inkubowano z nieistotną króliczą IgG jako kontrolną lub IgA5aR IgG (1 lub 10 ug) przez 20 minut. Następnie, wiązanie nM 125I (3 mysiego C5a występowało przez 20 minut w obecności preparatów IgG. Stwierdzono znaczące hamowanie (60. 73%) wiązania z. C5aR w zależności od ilości. C5aR obecnego. Ilość niespecyficznego wiązania oceniano w obecności 100-krotnego nadmiaru nieznakowanego C5a i zmierzono z około 60 cpm (odjęto w osiach y)
[patrz też: termometr microlife instrukcja obsługi, benzoesan sodu szkodliwość, paznokcie w dwóch kolorach ]
[więcej w: śliwka w czekoladzie kalorie, trojanek, jacek rybacki ]