TGF-dependent zależna patogeneza wypadania płatka zastawki mitralnej w mysim modelu zespołu Marfana ad 5

FLNA służy zatem jako pozytywny regulator TGF-a sygnalizacja. Mutacje zyskujące funkcjonalność w FLNA są odpowiedzialne za dziedziczone przez X dziedziczenie zespołu Melnick-Igły i dysplazji przednią (25), z których oba obejmują wypadnięcie płatka zastawki mitralnej. Zatem zwiększona ekspresja FLNA może być zarówno konsekwencją, jak i czynnikiem przyczyniającym się do nadmiaru TGF-a. sygnalizacja w ulotkach zaworowych z niedoborem fibryliny-1. TGF-. Wiadomo, że izoformy są istotnie zaangażowane w tworzenie zastawek AV u myszy i piskląt (26), a myszy z niedoborem Smad6, inhibitora TGF-a. i sygnalizacja BMP, wykazują przerost zastawki (27). BMP2 jest niezbędny do opracowania mezenchymalnej mięśnia sercowego u myszy (28) i działa synergistycznie z TGF-a3, aby zainicjować przejście nabłonkowo-mezenchymalne u kurcząt (29). BMP4 pomaga regulować proliferację komórek mezenchymalnych w poduszkach wsierdzia AV u myszy (30), a podwójne mutanty BMP6: BMP7 wyświetlają słabo rozwinięte i źle umieszczone zawory (31). Widoczny przerost zastawek AV obserwowany u myszy z niedoborem EGF wiążącego heparynę jest związany z dramatycznym wzrostem aktywowanego Smad1 / 4/5, co wskazuje na rozregulowanie BMP i nadmierną sygnalizację BMP (32). Podsumowując, wyniki te sugerują, że precyzyjna regulacja wielu członków TGF-. nadrodzina jest wymagana do uzyskania prawidłowej morfogenezy zastawki (33). Co ciekawe, pewna liczba członków TGF-. stwierdzono, że nadrodzina, w tym TGF-P 2 i BMP 2, 4 i 6, ulegała podwyższeniu w naszych analizach ekspresji. Jednym z wyjaśnień jest to, że TGF-. jest zdolny do pozytywnego sprzężenia zwrotnego zarówno poprzez autoindukcję, jak i krzyżową regulację innych członków rodziny (34). Jeśli chodzi o zwiększoną ekspresję BMP, istnieją dane sugerujące, że fibryliny mogą bezpośrednio wchodzić w interakcje z BMP i być może je koncentrować w miejscach zamierzonego działania (35, 36). Tak więc, trudno jest przewidzieć, czy wzrost ekspresji transkryptu dla wybranych BMP przełożyłby się na zwiększoną aktywność lub po prostu odzwierciedla indukcję sprzężenia zwrotnego z powodu awarii stężenia cytokin. Nasza obserwacja podwyższonego immunobarwienia BMP 2, 4 i 6 w zmutowanych płatkach zastawek i regulacji w górę Bmp2k odpowiadającego na BMP faworyzuje poprzednią hipotezę. Istnieje prawdopodobnie złożona sieć zmienionych kaskad sygnalizacyjnych obejmujących wielu członków TGF-. nadrodzina i ich efektorory niższego rzędu, które przyczyniają się do zmiany architektury i funkcji zastawki mitralnej w MFS. Jak zilustrowano w przypadku endoteliny-1, mechanizmy uprzednio uważane za odpowiedzialne za zmiany mykomatyczne w pierwotnym MVP mogą być również istotne dla choroby zastawki mitralnej w MFS. Ta praca dostarcza nowego kontekstu, w którym można dalej badać patogenezę nabytej myksomatycznej degeneracji zastawki mitralnej w zespole Marfana i bardziej powszechnych, nie-syndromicznych odmianach choroby. Metody Myszy. Wszystkie protokoły myszy zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Pielęgnacji i Użytkowania Zwierząt Uniwersytetu Johnsa Hopkinsa School of Medicine. Tworzenie linii myszy niosącej mutacje Fbn1 (C1039G) opisano wcześniej (13). Wszystkie analizy wykonano po krzyżowaniu wstecznym tej mutacji z tłem C57BL / 6J, umożliwiając prawidłowe porównania między miotami. W badaniach morfometrycznych badano 3. 10 myszy każdego istotnego genotypu w każdym wyznaczonym punkcie czasowym między P0.5P6.5.5 (3 (5 dla P0,5 P4.5 i 7 A 10 dla P6.5). Dziesięć myszy na genotyp przy P6.5 użyto do wytworzenia RNA do ilościowej reakcji PCR w czasie rzeczywistym. W analizach mikromacierzy, zastawki mitralne od 8 myszy na każdy genotyp zebrano przy P6.5. Genotypowanie przeprowadzono jak opisano wcześniej (13). Badanie mikroskopowe. Myszy uśmiercono z przedawkowaniem dawki halotanu (Sigma-Aldrich). Do analizy morfometrycznej i immunohistochemicznej, serca utrwalono w 10% zbuforowanej formalinie przez noc, ułożono w 1,5% agarze przed zatopieniem w parafinie i przygotowano szkiełka stosując 7. M przekrojów. Skrawki tkanki zatopionej w parafinie zostały przygotowane i zabarwione hematoksyliną i eozyną. Nocne inkubacje fragmentów P6.5 z pierwszorzędowymi przeciwciałami rozpoznającymi aktywny TGF-a (LC1-30, dostarczone przez K. Flanders, National Cancer Institute, Bethesda, Maryland, USA), LAP-y (R & D Systems), P-Smad2 (Cell Signaling Technology) i BMP 2, 4 i 6, lub Ki-67 (wszystkie z Santa Cruz Biotechnology Inc.) przeprowadzono. W każdym zestawie plam uwzględniono negatywne kontrole, które pomijały pierwszorzędowe przeciwciało. Skrawki P0.5 znakowano TUNEL przy użyciu zestawu do detekcji fragmentacji DNA TdT-Fragel (Oncogene Research Products). Barwienie immunohistochemiczne i TUNEL badano przy powiększeniu x100 przy użyciu mikroskopu Eclipse E400 (Nikon Inc.) i porównywano z wewnętrznym standardem kalibracji 10. M zawartym w każdym obrazie. Morfologia zaworu
[patrz też: śliwka w czekoladzie kalorie, warsaw shore odcinek 3 kinomaniak, gregor laubsch ]
[więcej w: marcin wójcik żona, warsaw shore odcinek 3 kinomaniak, marcin nikrant ]