TGF-dependent zależna patogeneza wypadania płatka zastawki mitralnej w mysim modelu zespołu Marfana cd

Oceniliśmy TGF-. aktywność w zmutowanych zastawkach przy użyciu przeciwciała poliklonalnego (LC1-30) specyficznego dla wolnej i aktywnej postaci TGF-a (14) (rysunek 2). Stopniowe zwiększenie immunoaktywności obserwowano w płatkach zastawki u zwierząt Fbn1C1039G / + i Fbn1C1039G / C1039G. Jeśli to po prostu odzwierciedla wzrost produkcji i wydzielanie TGF-a, oczekiwalibyśmy odpowiedniego zwiększenia ilości LAP-y1, ponieważ obfitość tego peptydu odzwierciedla ilość zmagazynowanego, utajonego TGF-a. Przeciwnie, nie zaobserwowaliśmy widocznej różnicy w poziomie LAP-y1 między genotypami (Figura 2). Zastosowanie przeciwciała skierowanego przeciwko fosforylowanej formie Smad2 (P-Smad2), która odzwierciedla aktywację wewnątrzkomórkowego TGF-a za pośrednictwem receptora. ścieżka odpowiedzi, pozwoliła nam ocenić TGF-. sygnalizacja (rysunek 2). Zaobserwowano wzrost P-Smad2 w zmutowanych zastawkach. Podsumowując, dane te są zgodne ze zwiększoną aktywacją cytokin w zmutowanych zastawkach mitralnych i wykazują, że zwiększona wolna TGF-a może wesprzeć zwiększoną sygnalizację w tym kontekście rozwojowym. Rysunek 2TGF-. aktywność i sygnalizacja w zastawkach mitralnych myszy z niedoborem fibryliny-1 (3; Analiza immunohistochemiczna z użyciem przeciwciał specyficznych dla wolnego i aktywnego TGF-a (LC1-30), LAP-a1 i P-Smad2 u myszy z dzikim typem (Fbn1 + / +) i z miotami albo heterozygotycznymi (Fbn1 + / y;) albo homozygotycznymi (Fbn1 (3 / P) dla mutacji C1039G. Zawory zmutowane wykazują zwiększone TGF-a aktywność i sygnalizacja, ale nie zwiększona ekspresja LAP-y1, co wskazuje na wzrost TGF-a aktywacja zamiast wytwarzania cytokin. Powiększenie, × 100. Pręty skali: 20 m. Fenotypowe ratowanie fenotypu zastawki mitralnej po TGF-a antagonizm in vivo. Dalsze badanie związku przyczynowo-skutkowego pomiędzy nadmiarem TGF-a aktywacja i sygnalizacja oraz zmieniona morfogeneza zastawki mitralnej została osiągnięta przy użyciu TGF-a antagonizm in vivo. Ciężarne myszy otrzymały iniekcję dootrzewnową przeciwciał neutralizujących TGF-y w dniach 14,5 i 17,5 po postoju, a zastawki mitralne zbadano u młodych na P6,5. Oba TGF-. Izoformy i 2 są neutralizowane in vivo i in vitro przez to przeciwciało (15, 16). Jak pokazano na Figurze 3, długość i grubość płatka zastawki były istotnie zmniejszone we wszystkich 3 genotypach po TGF-a. antagonizm. Wyraźnie widać było wpływ TGF-. antagonizm długości i grubości zastawki u zwierząt Fbn1 + / +, ale zaobserwowano zwiększony efekt u zmutowanych zwierząt z pełną normalizacją u myszy Fbn1C1039G / +. Dane te pokazują rolę TGF-y jako fizjologiczny regulator morfologii zastawki mitralnej i wspierają związek przyczynowy pomiędzy TGF-a rozregulowanie i choroba zastawki mitralnej w MFS. Figura 3 Ratowanie fenotypowe po TGF-a antagonizm. (A) Analiza morfometryczna długości zastawki mitralnej przy P6.5 u myszy nieleczonych (kontrolnych), u myszy otrzymujących nieistotne IgG (IgG) i u myszy otrzymujących TGF-a; neutralizujący Ab (NeuAb). Długość liści była znacznie krótsza u myszy leczonych neuAb. (B) Analiza morfometryczna grubości zastawki mitralnej po TGF-a antagonizm. Zawory z myszy leczonych NeuAb były znacznie mniej gęste niż te z przeciwciał traktowanych IgG dla wszystkich genotypów. Paski błędu wskazały 95% przedziały ufności. * P.; 0,005 vs. IgG; P.; 0,01 vs. IgG. Wyjaśnienie efektorów związanych z TGF-., które przyczyniają się do choroby zastawki mitralnej przy użyciu analiz ekspresji. Naszą kolejną inicjatywą było zidentyfikowanie cząsteczek efektorowych poniżej TGF-a sygnalizacja, która przyczynia się do morfogenezy zastawek AV. Szereg kandydujących genów, które są albo regulowane przez TGF-. lub są członkami TGF-. nadrodzina wykazała zwiększoną ekspresję w płatkach zastawkowych pochodzących od myszy z niedoborem fibryliny-1. przy P6.5, co oceniono za pomocą ilościowej reakcji PCR w czasie rzeczywistym. Informacyjnie, ci początkowo wybrani kandydaci, jak również inne geny reagujące na TGF-y, również wykazywali zwiększoną ekspresję w analizie mikromacierzy (tabela 1). Porównanie zwierząt Fbn1C1039G / + ze zwierzętami Fbn1 + / + wykazało pośrednią różnicę ekspresji genów dla większości badanych genów. Wyniki tych analiz ekspresji dodatkowo potwierdzają hipotezę, że zwiększony TGF-a aktywacja i przekazywanie sygnałów przyczynia się do patogenezy choroby zastawki mitralnej w stanie z niedoborem fibryliny-1. Tabela Analiza ekspresji TGF-;, pokrewne geny w zastawce fibrylo-in-1, a niedoborowej względem typu dzikiego Eksploracja. IGH3, proliferacja komórkowa, apoptoza i białka morfogenetyczne kości w zastawce mitralnej. Jednym z genów, które w naszej analizie ekspresji mysiej okazały się podwyższone, był indukowany przez TGF-. gen H3 (ajg-h3). Z powodu ograniczeń technicznych z użyciem serc myszy płodowych, prenatalną ekspresję. IGH3 oceniano stosując hybrydyzację in situ w sercach płodowych bydła
[przypisy: jacek bryndal, szczepionki na pneumokoki, olejowanie włosów kręconych ]
[więcej w: wypadanie płatka zastawki mitralnej, jacek bryndal, klaudia el dursi ]