Matrix – zależne od metaloproteinazy-7 Uwalnianie czynnika martwicy nowotworu w modelu przepukliny dyski przepuklinowej ad 5

Dodanie rekombinowanej MMP-7 do współhodowli przywróciło indukcję białka MMP-3. Co ciekawe, dodanie rekombinowanego TNF-a do kokultury dało równoważną indukcję białka MMP-3. Wreszcie, przywrócenie wytwarzania MMP-3 przez rMMP-7 zostało zablokowane przez neutralizujące przeciwciało wobec TNF-a. Wnioskujemy, że wytwarzanie MMP-7 przez makrofagi było wymagane do indukcji MMP-3 w współhodowlach i że w efekcie tym pośredniczyła droga, która obejmowała rozpuszczalny TNF-a. (sTNF-.). Wykazano, że MMP, w tym MMP-7, są zdolne do przetwarzania TNF-a. w jego rozpuszczalną postać (26). Aby ustalić, czy MMP-7 wywiera wpływ na uwalnianie sTNF-a, TNF-a mierzono za pomocą testu ELISA w kondycjonowanej pożywce z współhodowli dysków i makrofagów izolowanych z myszy bez mutacji typu MMP-7 i typu dzikiego. Rozpuszczalny TNF-a był łatwy do wykrycia w kondycjonowanej pożywce makrofagów / dysocjacji typu dzikiego typu dzikiego, podczas gdy mniej niż 2% tej ilości TNF-a był obecny w kondycjonowanej pożywce współzmiennych makrofagów MMP-7 (fig. 5a). Dodanie rekombinowanej MMP-7 do kohulofitów makrofagów z zerowym MMP-7 przywróciło ilość sTNF-a. do poziomu podobnego do obserwowanego dla makrofagów typu dzikiego, co wskazuje, że TNF-a był wytwarzany i był dostępny na powierzchni komórki, ale nie był uwalniany do kondycjonowanej pożywki pod nieobecność MMP-7. Wpływ MMP-7 na poziomy rozpuszczalnego TNF-a na powierzchni komórki badano również w wyizolowanych izolowanych makrofagach. Ponieważ test ELISA rozpoznaje tylko sTNF-y, TNF-a na powierzchni komórki zmierzono przez traktowanie przemytych makrofagów MMP-7 przez 2 godziny i oznaczanie ilości sTNF-a. wytworzony. Makrofagi typu dzikiego wytworzyły około 1,0 ng / ml sTNF-a. w ciągu 2 godzin (rysunek 5b). Reprezentowało to większość TNF-a wytworzone, ponieważ dodano rekombinowaną MMP-7 w celu uwolnienia dostępnego TNF-a na powierzchni komórki spowodowało tylko nieznaczne podniesienie całkowitej sTNF-. poziomy. Ilość powierzchniowo rozszczepialnego TNF-a z odcinającą MMP-7a. w pozbawionych makrofagów MMP-7A makrofagach było identyczne jak w makrofagach typu dzikiego, chociaż większość tego materiału była związana z powierzchnią komórki, jak określono przez brak sTNF-a. pod nieobecność egzogennej MMP-7. Ten efekt nie zmienił się w obecności inhibitora syntezy białek, cykloheksimidu, co dodatkowo wskazuje, że działanie MMP-7 nie było związane z syntezą TNF-a. ale po uwolnieniu z powierzchni komórki. Figura 5 Analiza rozpuszczalnego TNF-a na powierzchni komórki poziomy. (a) Czterdzieści osiem godzin pożywki kondycjonowanej z współhodowli dysków typu dzikiego (/ wt) i makrofagów typu dzikiego (wt /) lub makrofagów MMP-7 (7 (3 / /) analizowano pod kątem rozpuszczalnego TNF-a. poziomy za pomocą testu ELISA. Kokultury 7 | j / wt inkubowano pod nieobecność lub obecność rekombinowanej MMP-7 (rMMP-7, 100 ng / ml) przez czas trwania okresu hodowli. (b) dwugodzinna kondycjonowana pożywka z makrofagów typu dzikiego (wt) lub MMP-7a (7.) makrofagów pod nieobecność (w celu zmierzenia rozpuszczalnego TNF-a) lub obecności (do pomiaru TNF-a na powierzchni komórki) rekombinowanej MMP-7 (100 ng / ml). Gdy wskazano, dodano 10 ug / ml cykloheksimidu (CHX) w czasie trwania kondycjonowania. Wyniki są średnie i SD dla podwójnych próbek z 2 oddzielnych eksperymentów. Resorpcja dysku wymaga zależnego od matrylizyny uwalniania TNF-. i nacieku makrofagów. Wykazaliśmy, że do uwolnienia TNF-a potrzebna jest makrofagowa MMP-7. oraz do nacieku makrofagów w tkance dyskowej. Aby określić, czy którekolwiek z tych zdarzeń jest związane z wymaganiem MMP-7 do resorpcji krążka, makrofagi typu dzikiego i MMP-7 zerowe były hodowane wspólnie z krążkami typu dzikiego w obecności TNF-a. lub przeciwciała neutralizujące TNF-a i resorpcję krążka mierzono przez utratę masy mokrej. Jak wykazano wcześniej, krążki hodowane z makrofagami zerowymi MMP-7a nie wykazały żadnych dowodów resorpcji, podczas gdy makrofagi typu dzikiego indukowały 48,8. 5,5% utraty masy mokrej w okresie 3 dni (rysunek 6). TNF-. był wymagany do resorpcji krążka, na co wskazuje brak resorpcji w obecności neutralizujących przeciwciał przeciwko TNF-a. Niezdolność makrofagów z niedoborem MMP-7. do indukcji resorpcji została uratowana przez dodanie rekombinowanego TNF-a, co wskazuje, że resorpcja krążka wymaga zależnego od MMP-7 p uwalniania TNF-a. Aby ustalić, czy makrofagi były wymagane do resorpcji krążka wyłącznie jako źródło TNF-a lub jeśli infiltracja makrofagów jako taka była również ważnym składnikiem resorpcji krążka, rTNF-a dodano bezpośrednio do krążków typu dzikiego w nieobecności makrofagów. Chociaż rTNF-. było wystarczające do indukowania MMP-3 w krążkach, nie było wystarczające do indukowania resorpcji krążka mierzonej przez utratę masy mokrej (Figura 6, prawa kolumna;
[przypisy: maciej zagłoba zygler, olga jahr, olejowanie włosów kręconych ]
[przypisy: marcin nikrant, olga jahr, śliwka w czekoladzie kalorie ]