Matrix – zależne od metaloproteinazy-7 Uwalnianie czynnika martwicy nowotworu w modelu przepukliny dyski przepuklinowej cd

Testy przeprowadzono zgodnie z protokołem producenta i odczytano przy 450 nm za pomocą czytnika mikropłytek. Próbki i standardy zostały przeprowadzone w dwóch egzemplarzach. Test był liniowy pomiędzy 5,1 pg / ml a 1,98 ng / ml. Wszystkie wartości wyrażono jako średnią i SD. Analizę statystyczną przeprowadzono za pomocą testu Manna-Whitneya, a P mniej niż 0,05 uznano za statystycznie istotne. Wyniki Makrofag MMP-7 jest wymagany do resorpcji dysku. Doniesiono, że makrofagi wytwarzają wiele MMP, w tym MMP-3 i MMP-7 (18-22). W mysim modelu komórkowej hodowli resorpcji HD, hodowla makrofagów i chondrocytów z otoczką tioglikolanu otoczonych perełkami alginianu spowodowała znaczącą indukcję zarówno białka MMP-3, jak i MMP-7 w podłożu kulturowym (13). RT-PCR ujawnił, że mRNA dla obu tych enzymów zostało wyprodukowane przez makrofagi (13). W celu określenia, czy wymagane jest wytworzenie makrofagów któregokolwiek z tych MMPs do resorpcji krążka, wyizolowano makrofagi z myszy typu dzikiego, myszy z MMP-3. Null i MMP-7. Null i umieszczono w kokulturze z krążkami międzykręgowymi myszy typu dzikiego. Resorpcję krążka mierzono określając wilgotną masę tkanki przed i 3 dni po kokulturze z makrofagami. Dyski hodowane wspólnie z makrofagami typu dzikiego wykazały 38,7. 3,2% spadek masy mokrej (ryc. 1). Makrofagi z myszy pozbawionych MMP-3a wykazały podobne 55,2. 2,1% zmniejszenie masy mokrej w 3-dniowym okresie hodowli. W przeciwieństwie do tego, krążki hodowane wspólnie z makrofagami myszy pozbawionych MMP-7a nie wykazywały resorpcji w tym okresie czasu i zachowały swoją pierwotną masę, podobną do tej obserwowanej dla krążków hodowanych w nieobecności makrofagów. Tak więc makrofagowa MMP-7, ale nie MMP-3, jest wymagana do resorpcji dysku w modelu ko-kultury. Figura Rola makrofagowych MMP w resorpcji dysku in vitro. Krążki z myszy typu dzikiego (/ wt) hodowano wspólnie z makrofagami z myszy typu dzikiego (wt /), MMP-3 (null (3 (3) i MMP-7 (null (7 (j /)). Mokre masy określono w dniu 0 i dniu 3, a procent początkowej mokrej masy obliczono dla każdej pojedynczej tarczy. Przedstawione wartości reprezentują średnią i SD z 3. 5 dysków / grupę. * Znacząca różnica w stosunku do początkowej masy na mokro (P <0,05). Rola MMP-7 w naciekaniu i migracji makrofagów. Zaobserwowaliśmy wcześniej dodatnią korelację między resorpcją dysku a infiltracją dysku przez makrofagi (13). W celu określenia, czy wymóg fagowania makrofagiem MMP-7 do resorpcji krążenia był również związany z wpływem na naciek makrofagów, makrofagi otrzewnej wyizolowane z myszy typu dzikiego, MMP-3. Null i myszy pozbawione MMP-7a były znakowane fluorescencyjnie markery i kokulturowane z dyskami typu dzikiego. Wild-type i MMP-3. /. makrofagi przyłączone do powierzchni dysków i zaatakowały zewnętrzny pierścień włóknisty, pośrednią strefę przejściową i wewnętrzne jądro warstw miażdżystych (Figura 2). Natomiast większość MMP-7. /. makrofagi pozostały na zewnątrz dysku, bez infiltracji do strefy przejściowej lub jądra miażdżystego oraz zmniejszenia o 96% liczby komórek, które penetrowały pierścienie włókniste. Te wyniki sugerują potencjalną rolę MMP-7 w migracji makrofagów i / lub infiltracji do chrząstki krążkowej. Figura 2 Ilościowa analiza nacieku makrofagów w hodowlach narządowych MMP-null. Makrofagi z myszy dzikiego typu lub myszy bez MMP hodowano wspólnie z tkanką dysków typu dzikiego. Wskazany jest genotyp myszy oddających makrofagi / tkankę dyskową. wt = typ dziki; 3. = MMP-3. Null, 7. = Tkanka zerowa MMP-7a. W reprezentatywnym eksperymencie całą tkankę dyskową podzielono na 3 regiony: jądro miażdżyste (NP, wewnętrzny obszar galaretowaty), annulus fibrosus (AF, warstwa zewnętrzna) i strefa przejściowa (TZ, warstwa pośrednia) oraz liczba znakowanych PKH26 Wyznaczono czerwone fluorescencyjne makrofagi w 3 polach o dużej mocy w każdym regionie. Dane analizowano za pomocą testu Kruskala-Wallisa i przedstawiono je jako średnie. SD. * Różnica istotna statystycznie (P <0,05) w porównaniu z typem dzikim. Aby zbadać zdolność migracyjną makrofagów zerowych MMP-7F, wykorzystano zmodyfikowany test komory Boydena do określenia odsetka komórek zdolnych do migracji przez 8-. M porów do odległej strony filtra poliwęglanowego. Makrofagi typu dzikiego wykazywały bardzo małą zdolność migracji w kierunku DMEM bez surowicy z BSA, ale wykazały 8-krotny wzrost liczby komórek migrujących w kierunku podłoża zawierającego 10% FBS (Figura 3a). Makrofagi MMP-7a null i MMP-3a nie wykazywały statystycznej różnicy w ich zdolnościach migracyjnych w porównaniu z makrofagami typu dzikiego (odpowiednio 5,3-krotnie i 5,7-krotnie, Figura 3a). [przypisy: maciej syka, śliwka w czekoladzie kalorie, trojanek ] [hasła pokrewne: klaudia el dursi, 5lo bydgoszcz, hiperhomocysteinemia ]