Matrix – zależne od metaloproteinazy-7 Uwalnianie czynnika martwicy nowotworu w modelu przepukliny dyski przepuklinowej czesc 4

Wcześniej wykazaliśmy, że współhodowle makrofagów / dysków wytwarzają silny chemoatraktant makrofagów (13). Podobnie jak w przypadku wyników uzyskanych za pomocą FBS, nie było różnicy w zdolności makrofagów typu dzikiego, MMP-3. Null i MMP-7. Null do odpowiedzi na aktywność chemotaktyczną wytwarzaną przez kondycjonowane podłoże z makrofagów / hodowle dyskowe (Figura 3b). Figura 3 Jakościowa analiza aktywności migracyjnej makrofagów. Typu dzikiego (wt), MMP-3full (3a) i makrofagi MMP-7a (7a) umieszczono w górnej studzience zmodyfikowanej komory Boydena, a liczba makrofagów migrujących przez filtr była policzono w 6 losowych polach o dużej mocy x 400 dla każdej studzienki. (a) BSA (200 .g / ml) w DMEM lub FBS (10%) w DMEM umieszczono w dolnej komorze. (b) Kondycjonowaną pożywkę z krążków międzykręgowych od myszy typu dzikiego (krążek) lub krążki hodowane wspólnie z makrofagami typu dzikiego (m / krążek) umieszczono w dolnej komorze. Dane z 2 eksperymentów przeprowadzonych w trzech powtórzeniach analizowano za pomocą testu Manna-Whitneya i przedstawiono jako średnie. SD. * Różnice istotne statystycznie (P <0,05) w porównaniu z pożywką kontrolną. Do uwolnienia TNF-a wymagana jest makrofaga MMP-7. i indukcja chondrocytowego MMP-3. Niezdolność makrofagów zerowych MMP-7 do infiltracji tkanki dysków przypominała wyniki obserwowane uprzednio makrofagami typu dzikiego i dyskami zerowymi MMP-3F. Przy zastosowaniu identycznego projektu eksperymentalnego infiltracja makrofagów do współhodowanej tkanki krążka została skutecznie zahamowana, gdy chondrocyty dysku nie były w stanie wytworzyć MMP-3 (13). Wykazaliśmy, że ważną rolą chondrocytowego MMP-3 jest uwalnianie chemotaktycznego makrofaga. Ta obserwacja sugeruje możliwość, że istnieje związek między makrofagiem MMP-7 i uwalnianiem chemoatraktanta zależnego od MMP-3a. Demonstruowaliśmy wcześniej, że do indukcji chondrocytowego MMP-3 niezbędna jest kokulturacja z makro-fagami (13). Aby określić, czy makrofagowa MMP-7 była wymagana do indukcji MMP-3 w hodowlach z korzeniami, kondycjonowaną pożywkę z makrofagów dzikich typu typu MMP-7. I hybrydyzowanych z dyskami typu dzikiego analizowano pod kątem białka MMP-3 metodą Western blotting. Kokultury z makrofagami typu dzikiego spowodowały indukcję białka MMP-3, podczas gdy nie zaobserwowano MMP-3 po hodowli z pozbawionymi MMP-7a makrofagami (Figura 4b, ostatnie 2 ścieżki). Tak więc do indukcji krążka MMP-3 w hodowlach konieczne było wytwarzanie MMP-7 przez makrofagi. Poprzednie badania wskazywały, że zarówno makrofagi, jak i chondrocyty otoczone alginianem wytwarzają mRNA MMP-3, ale najbardziej dramatyczny wpływ kokultury na MMP-3 zdaje się występować w chondrocytach (13). Figura 4 Rola MMP-7 w TNF-a indukcja MMP-3. MMP-3 w kondycjonowanej pożywce z 2-dniowych współhodowli dysków z myszy typu dzikiego (wt disc) i makrofagów z wt (wt. M.) Lub myszy MMP-7. Null (7-m.) Analizowano metodą Western blotting. . (a) Przeciw mysiemu TNF-a przeciwciało ((TNF-a, ng / ml), anty-mysia IL-1 p (A-IL-la, 2 .g / ml) lub kontrolnej Ig G (1 ng / ml) dodano do kultur, jak wskazano. (b) Rekombinowany mysi TNF-a (rTNFa, ng / ml), przeciw mysiemu TNF-a przeciwciało (a-TNF-a, ng / ml) lub rekombinowane MMP-7 (rMMP-7, ng / ml) dodano do pożywki. Strzałka wskazuje na migrację rekombinowanego szczurzego MMP-3. Potencjalny mechanizm indukcji MMP-3 przez współhodowlę z makrofagami jest przez cytokiny zapalne wytwarzane przez makrofagi. Zarówno TNF-a i IL-1. wykazano, że są wytwarzane przez aktywowane makrofagi (23) i wykazano, że oba wywołują MMP-3 (24, 25). Aby określić, czy którakolwiek z tych cytokin była wymagana do indukcji MMP-3 w hodowlach, kondycjonowanej pożywce z współhodowli makrofagów otrzewnowych i całej tkanki płytkowej w obecności przeciwciał neutralizujących aktywność mysiego TNF-a. i IL-1. został zebrany. Ekspresja MMP-3 w pożywce kulturowej była silnie hamowana przez TNF-a. neutralizujące przeciwciało, ale utrzymywano je w obecności kontrolnej IgG (Figura 4a). Przeciwnie, neutralizujące przeciwciała przeciwko IL-1P miał bardzo niewielki wpływ na indukcję MMP-3 (rysunek 4a). Dlatego wnioskujemy, że TNF-a makrofagów odgrywa ważną rolę w zwiększaniu ekspresji MMP-3 w naszym modelu kokultury. Aby określić, czy niezdolność makrofagów MMP-7 zerowych do upregulacji MMP-3 jest związana z redukcją pochodzących z makrofagów, rozpuszczalnego TNF-a, makrofagi MMP-7a zerowe hodowano wspólnie z krążkami typu dzikiego i kondycjonowaną pożywką. analizowano pod kątem indukcji MMP-3 metodą Western blotting. Jak opisano wcześniej, makrofagi MMP-7E null nie indukowały MMP-3, w przeciwieństwie do silnej indukcji białka MMP-3 przez makrofagi typu dzikiego (Figura 4b). [patrz też: młody jęczmień w proszku, paznokcie w dwóch kolorach, joanna derybowska ] [więcej w: artur puzio, marcin wójcik żona, warsaw shore odcinek 3 kinomaniak ]