Systemowo wyprowadzone komórki jelita grubego CD4 + Th2 odgrywają centralną rolę w alergicznej biegunki z udziałem STAT6 ad 5

Synteza cytokin przez komórki jednojądrzaste wyizolowane ze śledziony oraz z małych i dużych jelit kontrolnych (otwarte słupki) lub indukowanych przez biegunkę (wypełnione słupki) myszy. Komórki jednojądrzaste hodowano w obecności 100 .g / ml OVA przez 4 dni, a następnie supernatanty hodowli analizowano za pomocą odpowiedniego ELISA specyficznego dla cytokiny. (b) Ekspresja mRNA specyficznego dla cytokiny Th1 (IFN-a) i Th2 (IL-4 i IL-13) przez całe limfocyty i CD4 +. Limfocyty T z jelita grubego kontrolnego (otwarty okrąg) i wywołanego biegunką (zamknięty okrąg) myszy. Ilościowe metody RT-PCR przeprowadzono przy użyciu LightCycler. Dane te są reprezentatywne dla dwóch niezależnych eksperymentów zawierających od 5 do 7 myszy w każdej grupie. AP <0,05 w porównaniu do myszy kontrolnych. ND, niewykrywalny. STAT6. /. myszy były chronione przed biegunką wywołaną wielokrotnym doustnym prowokowaniem za pomocą OVA. Aby bezpośrednio zbadać rolę dominujących cytokin typu Th2 (tj. IL-4 i IL-13) w rozwoju biegunki, w badaniu indukcji biegunki zastosowano myszy o specyficznym działaniu genu pozbawione STAT6. Co ciekawe, STAT6. /. myszy były całkowicie chronione przed rozwojem biegunki wywołanej OVA, bez śladu infiltracji eozynofili obserwowanej w ich dużych jelitach (Figura 4a). Jak można się było spodziewać u myszy pozbawionych odpowiedzi cytokin Th2, nie wykryto wzrostu całkowitego lub swoistych względem OVA IgE IgE w surowicy (Figura 4b). Co więcej, wykryto znacznie mniej specyficznych dla OVA, IgG i IgA AFCs w jelicie grubym STAT6. /. myszy niż myszy dzikiego typu (Figura 4c). Aby potwierdzić to odkrycie na poziomie białka, w którym pośredniczy i indukowane przez STAT6, dwie grupy myszy BALB / c traktowano szczurzym mAb anty-mysim IL-4 lub mAb kontrolnym szczurzym IgG2b dopasowanym izotypem drogą dootrzewnową. Myszy, którym podawano mAb anty-IL-4, nie rozwinęły specyficznej dla OVA specyficznej dla IgE. Biegunek, podczas gdy ciężka biegunka została wywołana w grupie kontrolnej (Tabela 1). Wyniki te wyraźnie pokazują, że rozwój biegunki wywołanej OVA jest całkowicie zależny od odpowiedzi typu Th2 regulowanego STAT6. Figura 4 Zabezpieczenie wywołanej OVA biegunki w STAT6. /. myszy. W jelicie grubym STAT6. Nie zaobserwowano objawów biegunki lub nacieku eozynofili. myszy (a). Znacząco niższe poziomy całkowitych lub swoistych względem OVA IgEA w surowicy (b) i swoistych wobec OVA IgG i IgA AFC w jelicie grubym (c) STAT6a /. myszy (r / r) odnotowano w porównaniu z myszami typu dzikiego (+ / +). AP <0,01 w porównaniu do myszy typu dzikiego. Tabela Zabezpieczenie wywołanej OVA biegunki u myszy leczonych mAb anty-IL-4 Systemowo zagruntowane śledziony komórki CD4 + T selektywnie migrowały do jelita grubego i ulegały ekspresji cytokin typu Th2 u myszy, którym podawano dużą dawkę doustnego Ag. Ponieważ reakcje komórek T i B specyficzne dla hiper-ag zostały zaobserwowane w jelicie grubym i śledzionie, ale nie w jelicie cienkim myszy indukowanych biegunką, wykorzystaliśmy eksperyment adoptywny z myszami GFP Tg do zbadania możliwości, że krzyżówka - system sieciowy może istnieć między przedziałami ogólnoustrojowymi (tj. śledzioną) i śluzówkową (tj. jelito grube). W tym celu śledzionowe komórki T CD4 + od systemowo zagruntowanych myszy GFP Tg przeniesiono adoptywnie na myszy SCID. Jak pokazano na Figurze 5, a i b, znacząco wyższe liczby odtworzonych komórek T GFP + CD4 + preferencyjnie rekrutowano do dużych niż do jelita cienkiego biorców myszy SCID po podaniu dużej dawki doustnej Ag (54,3 vs. 16,1%). Ponadto, myszy SCID, które otrzymały układowo zagruntowane śledziony komórki GFP + CD4 + śledziony, rozwinęły biegunkę po doustnym prowokacji OVA (dane nie przedstawione). Figura 5Pigracja na poziomie strukturalnie sondowanych śledzionowych komórek GFP + CD4 + do dużych jelit myszy SCID. (a) Wzór migracji komórek T GFP + uzyskanych ze śledziony oraz małych i dużych jelit myszy SCID, którym komórki T GFP + CD4 + zostały adoptywnie przeniesione. (b) Analiza histologiczna śledziony oraz jelita cienkiego i grubego izolowane od myszy SCID-biorców. Zastosowano oryginalne powiększenie × 40 lub × 100. (c) Ekspresja mRNA specyficznego dla cytokiny Th1 (IFN-a) i Th2 (IL-4, IL-5 i IL-13) w limfocytach uzyskanych ze śledziony oraz jelita cienkiego i grubego biorców myszy SCID. (d) Reprezentuje częstotliwość IFN- oraz komórki wydzielające IL-4a, co określono przez wewnątrzkomórkowe barwienie cytokin. Przedstawiono reprezentatywne wyniki z dwóch indywidualnych eksperymentów. Analiza profili cytokin limfocytów metodami RT-PCR wykazała, że wyższe ekspresje cytokin typu Th2 (np. IL-4, IL-5 i IL-13) wykryto w limfocytach jelita grubego niż w jelicie cienkim limfocyty myszy SCID, które otrzymały limfocyty T GFP + CD4 + (Figura 5c) [patrz też: szczepionki na pneumokoki, termometr microlife instrukcja obsługi, joanna derybowska ] [podobne: olga jahr, śliwka w czekoladzie kalorie, trojanek ]